Fascin蛋白對OLP發(fā)生的作用論文
本文作者：杜勇、陳宇、李浩渤 單位：河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院口腔內(nèi)科、河北省廊坊市人民醫(yī)院口腔科
口腔扁平苔蘚(orallichenplanus，OLP)是口腔黏膜一種常見的非感染性慢性炎癥，目前被認為是細胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。國內(nèi)外研究相繼表明OLP具有癌變傾向，其癌前性質(zhì)引起廣泛關(guān)注［1］。Fascin蛋白是一種細胞骨架蛋白，F(xiàn)ascin蛋白的異常表達可引起腫瘤細胞運動性顯著增強和細胞黏附能力的改變，使腫瘤細胞具有更強的侵襲性，進入淋巴間隙，淋巴管和血管，增加轉(zhuǎn)移幾率。研究發(fā)現(xiàn)fascin蛋白在多種腫瘤組織和癌前病變組織中呈現(xiàn)陽性表達，其陽性表達的腫瘤組織學(xué)分級或者侵襲性往往較高［1－3］。進一步的研究發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白在口腔白斑和口腔鱗狀細胞癌中呈現(xiàn)過高表達［4，5］。本研究通過免疫組化的試驗方法檢測fascin蛋白在OLP中的表達，進一步探討OLP癌變的發(fā)病機制，為OLP癌變的早期診斷和治療提供依據(jù)。
1資料與方法
1．1一般資料
收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院1995至2009年OLP蠟塊標(biāo)本52例(所有患者在取標(biāo)本前未經(jīng)任何治療)為試驗組(OLP組)，每例標(biāo)本均進行HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗的病理醫(yī)師閱片后確診。其中男28例，女24例;年齡38～73歲，平均年齡52．6歲。正常口腔黏膜組織41例為對照組(NM組)，均取自囊腫旁及牙槽骨整形手術(shù)時切除的正常黏膜組織，每例均進行HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗的病理醫(yī)師閱片后確診。其中男22例，女19例;年齡21～68歲，平均年齡31．6歲。2組一般資料有均衡性。
1．2主要試劑與儀器
試劑:SP免疫組化試劑盒、一抗(購自博士德分裝抗體)、二氨基聯(lián)苯劑(DAB)顯色劑、多聚賴氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑均購于河北博海生物有限公司。儀器:顯微鏡(日本奧林巴斯BX51T-PHD-J11)、CMOS(日本奧林巴斯)、多功能真彩色細胞圖象分析管理系統(tǒng)(美國MediaCy-bernetics公司Image-ProPlus)、切片機(德國萊卡RM2015)、離心機(北京離心機廠LDZ5-2型)、電子天平(瑞士METTERAE100型)、移液器(德國EPPENDORF)、干燥箱(日本三洋MIR-153型)、低溫冰箱(日本三洋MDF-382E型)、恒溫水浴箱(江蘇太倉醫(yī)用儀器廠DSHZ-300型)、醫(yī)用微波爐(浙江臨安愛迪儀器廠YWY781B型)。
1．3對照試驗
用已知的Fascin蛋白陽性的口腔鱗癌標(biāo)本作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。
1．4試驗方法
采用免疫組織化學(xué)SP法(過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素法)。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個蠟塊切為5μm的切片，共切3張，1張HE染色，1張作為陰性對照，1張Fascin蛋白染色。
1．5結(jié)果判定
Fascin蛋白染色判定參照Hashimoto的標(biāo)準，以細胞膜和細胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒為陽性染色，每張切片隨機計數(shù)10個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞。據(jù)陽性細胞百分率判定:(1)未見棕黃色顆粒為陰性;(2)＜25%為弱陽性(+);(3)25%～75%為陽性(++);(4)＞75%為強陽性(+++)。1．6統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS17．0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用2檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2結(jié)果
2．12組Fascin陰性率比較
黏膜標(biāo)本中均呈陰性表達;NM組標(biāo)本呈現(xiàn)弱陽性表達(陽性細胞數(shù)＜25%)，細胞膜和細胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒，其余均呈現(xiàn)陰性表達，陽性率為9．62%，陽性率高于NM組(2=4．166，P＜0．05)。圖1、2。
2．2OLP組Fascin蛋白與性別、年齡的關(guān)系
在性別和年齡的對照中，fascin蛋白在口腔扁平苔蘚中的'表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。見表1。
3討論
Fascin蛋白在細胞的遷移、黏附等過程中發(fā)揮重要作用。Fascin蛋白能夠與F-肌動蛋白結(jié)合成平行有序的束狀結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)能夠有效地加強肌動蛋白細胞骨架，抵抗細胞遷移時由細胞突起的運動引起的細胞膜延伸，從而對細胞移動起著重要作用。Fascin蛋白的表達與腫瘤的分化增殖、細胞遷移及浸潤侵襲密切相關(guān)，為腫瘤早期診斷和預(yù)后的判定提供重要的依據(jù)。研究證實Fascin蛋白在正常黏膜中不表達或低表達，而在癌組織中高表達［1－3］。國內(nèi)試驗證實口腔鱗狀細胞癌的Fascin蛋白表達顯著高于正常黏膜組織［4，5］。王德明［5］還發(fā)現(xiàn)在癌旁正常的口腔黏膜組織中也有Fascin蛋白的表達，12例口腔黏膜良性增生組織中2例出現(xiàn)Fascin蛋白表達。但未見報道在癌前病變OLP中Fascin蛋白的表達情況。本實驗應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測了Fascin蛋白在41例正常口腔黏膜標(biāo)本和52例OLP標(biāo)本中的表達。NM組中Fascin蛋白均呈陰性表達;OLP組中5例標(biāo)本呈現(xiàn)弱陽性表達(陽性細胞數(shù)＜25%、細胞膜和細胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒)，其余均呈現(xiàn)陰性表達，陽性率為9．62%，陽性表達率高于正常口腔黏膜(P＜0．05)，這與以往的研究［6］相近，正常食管黏膜中Fascin蛋白呈陰性表達或低表達，而在癌前病變食管黏膜的不典型性增生中Fascin蛋白呈現(xiàn)陽性表達，隨著食管癌的發(fā)展Fascin蛋白的陽性表達是逐漸增強的。本實驗結(jié)果顯示OLP中Fascin蛋白的陽性率高于正常口腔黏膜，說明OLP存在潛在惡變的可能，F(xiàn)ascin蛋白可能在OLP惡變的過程中發(fā)揮一定的作用。但尚不能揭示Fascin蛋白與OLP惡變存在直接關(guān)系，F(xiàn)ascin蛋白在OLP惡變發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制仍需要進一步的研究。
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